Beherrschung der Bradford Protein Assay Berechnung für eine genaue Proteinquantifizierung
Formel: Der-Bradford-Protein-Assay-ist-eine-schnelle-und-genaue-Methode-zur-Bestimmung-der-Proteinkonzentration-in-einer-Lösung.-Diese-Technik-basiert-auf-der-Bindung-des-Coomassie-Brilliant-Blue-Farbstoffs-an-Proteine,-was-zu-einer-Farbveränderung-führt,-die-mit-einem-Spektralphotometer-gemessen-werden-kann.-Das-Ausmaß-der-Farbveränderung-ist-direkt-proportional-zur-Proteinkonzentration. Die-Formel-zur-Berechnung-der-Proteinkonzentration-lautet: Das-Ergebnis,-Proteinkonzentration,-wird-in-Mikrogramm-pro-Milliliter-(µg/mL)-ausgedrückt. Gehen-wir-ein-Beispiel-durch,-um-zu-sehen,-wie-die-Berechnung-in-der-Praxis-funktioniert: Mit-der-Formel-können-wir-die-Proteinkonzentration-berechnen: Das-ergibt: Betrachten-Sie-ein-Forschungslabor,-in-dem-Wissenschaftler-die-Menge-an-Protein-in-verschiedenen-Zelllysaten-quantifizieren.-Sie-führen-einen-Bradford-Protein-Assay-durch-und-finden-heraus,-dass-die-Absorption-für-eine-ihrer-Proben-0.65-beträgt.-Aus-früheren-Experimenten-wissen-sie,-dass-der-Intercept-0.08-und-die-Steigung-1.4-beträgt.-Wenn-sie-diese-Werte-in-unsere-Formel-einsetzen: Das-ergibt: Diese-schnelle-und-genaue-Messung-hilft-den-Forschern,-ihre-Experimente-fortzusetzen-und-sicherzustellen,-dass-sie-mit-den-richtigen-Proteinkonzentrationen-arbeiten. Es-gibt-einige-häufige-Probleme,-die-bei-der-Durchführung-eines-Bradford-Protein-Assay-auftreten-können: A:-Verdünnen-Sie-Ihre-Probe-so,-dass-ihre-Absorption-innerhalb-des-Bereichs-der-Standardkurve-liegt,-und-berechnen-Sie-dann-die-Konzentration-neu. A:-Der-Bradford-Protein-Assay-ist-speziell-darauf-ausgelegt,-die-Absorption-bei-595-nm-zu-messen.-Die-Verwendung-einer-anderen-Wellenlänge-kann-zu-ungenauen-Ergebnissen-führen. A: Bereiten Sie jedes Mal, wenn Sie den Assay durchführen, frische Standards vor und messen Sie diese genau. Verwenden Sie mehrere Wiederholungen und mitteln Sie die Ergebnisse.proteinConcentration-=-(absorbance---intercept)-/-slope
Einführung-in-die-Bradford-Protein-Assay-Berechnung
Verstehen-der-Formel
proteinConcentration-=-(absorbance---intercept)-/-slope
Berechnungsbeispiel
Absorption
-=-0.75Intercept
-=-0.1Slope
-=-1.5proteinConcentration-=-(0.75---0.1)-/-1.5
proteinConcentration-=-0.43-µg/mL.
Beispiel-aus-dem-echten-Leben
proteinConcentration-=-(0.65---0.08)-/-1.4
proteinConcentration-=-0.41-µg/mL.
Häufige-Probleme-und-Umgang-mit-Fehlern
Häufig-gestellte-Fragen-(FAQs)
F:-Was-mache-ich,-wenn-mein-Absorptionswert-außerhalb-des-Bereichs-der-Standardkurve-liegt?
F:-Kann-ich-eine-andere-Wellenlänge-für-den-Bradford-Assay-verwenden?
F:-Wie-stelle-ich-die-Genauigkeit-meiner-Standardkurve-sicher?
Tags: Biochemie, Proteinanalyse, Labor Methoden