Beherrschung der Bradford Protein Assay Berechnung für eine genaue Proteinquantifizierung

Einführung in die Berechnung des Bradford-Proteinassays

Der Bradford-Proteinassay ist eine schnelle und genaue Methode zur Bestimmung der Proteinkonzentration in einer Lösung. Diese Technik basiert auf der Bindung des Farbstoffs Coomassie Brilliant Blue an Proteine, was zu einer Farbänderung führt, die mit einem Spektralphotometer gemessen werden kann. Der Grad der Farbänderung ist direkt proportional zur Proteinkonzentration.

Die Formel verstehen

Die Formel zur Berechnung der Proteinkonzentration lautet:

• Absorption: Der Absorptionswert, gemessen bei 595 nm mit einem Spektralphotometer.
• Achsenabschnitt: Der y-Achsenabschnitt der während des Tests generierten Standardkurve, normalerweise erhalten aus einer linearen Regressionsanalyse.
• Steigung: Die Steigung der Standardkurve, ebenfalls erhalten aus der linearen Regressionsanalyse.

Das Ergebnis, Proteinkonzentration, wird in Mikrogramm pro Milliliter (µg/ml) ausgedrückt.

Beispielberechnung

Sehen wir uns ein Beispiel an, um zu sehen, wie die Berechnung in der Praxis funktioniert:

• Angenommen, wir haben die folgenden Daten aus einem abgeschlossenen Bradford-Proteintest:
• Absorption = 0,75
• Achsenabschnitt = 0,1
• Steigung = 1,5

Mithilfe der Formel können wir die Proteinkonzentration berechnen:

Das Ergebnis ist:

Beispiel aus dem echten Leben

Stellen Sie sich ein Forschungslabor vor, in dem Wissenschaftler daran arbeiten, die Proteinmenge in verschiedenen Zelllysaten zu quantifizieren. Sie führen einen Bradford-Proteintest durch und stellen fest, dass die Absorption für eine ihrer Proben 0,65 beträgt. Aus früheren Experimenten wissen sie, dass der Achsenabschnitt 0,08 und die Steigung 1,4 beträgt. Setzen wir diese Werte in unsere Formel ein:

Das Ergebnis ist:

Diese schnelle und genaue Messung hilft den Forschern, mit ihren Experimenten fortzufahren und sicherzustellen, dass sie mit den richtigen Proteinkonzentrationen arbeiten.

Häufige Probleme und Handhabungsfehler

Bei der Durchführung eines Bradford-Proteintests können einige häufige Probleme auftreten:

• Falsche Erstellung einer Standardkurve: Stellen Sie sicher, dass Sie Ihre Standards genau vorbereiten und messen.
• Interferenz durch andere Substanzen: Achten Sie auf Substanzen, die den Test stören können, wie z. B. Reinigungsmittel.
• Messfehler: Stellen Sie sicher, dass das Spektralphotometer richtig kalibriert ist und ordnungsgemäß funktioniert.

Häufig gestellte Fragen (FAQs)

F: Was passiert, wenn mein Absorptionswert außerhalb des Bereichs der Standardkurve liegt?

A: Verdünnen Sie Ihre Probe so, dass ihre Absorption im Bereich der Standardkurve liegt, und berechnen Sie dann die Konzentration neu.

F: Kann ich für den Bradford-Test eine andere Wellenlänge verwenden?

A: Der Bradford-Protein-Test ist speziell für die Messung der Absorption bei 595 nm konzipiert. Die Verwendung einer anderen Wellenlänge kann zu ungenauen Ergebnissen führen.

F: Wie stelle ich die Genauigkeit meiner Standardkurve sicher?

A: Bereiten Sie bei jeder Durchführung des Tests frische Standards vor und messen Sie diese genau. Verwenden Sie mehrere Replikate und mitteln Sie die Ergebnisse.