Verstehen der Bradford Protein Assay Gleichung: ein umfassender Leitfaden

Die Bradford-Proteinassay-Gleichung verstehen

Der Bradford-Proteinassay ist ein schnelles und genaues spektroskopisches Analyseverfahren, das verwendet wird, um die Proteinkonzentration in einer Lösung zu messen. Hier ist die Aufschlüsselung:

• CBradford ist die Konzentration des Proteins (mg/ml).
• A595 ist der Absorptionswert der Probe bei 595 nm.
• ABlank ist der Absorptionswert des Blanks (kein Protein).
• k ist die Steigung, die aus der Standardkurve abgeleitet wird (mg/(ml * Absorption)).

Parameter nutzen: Beispiele und Interpretationen

Stellen Sie sich vor, Sie haben eine Probenlösung und geben sie in ein Spektralphotometer. Die Absorption bei 595 nm wurde mit 0,5 aufgezeichnet, für den Blank betrug sie 0,1. Die Steigung der BSA-Standardkurve (k) beträgt 0,2 mg/ml pro Absorptionseinheit. Wenn wir dies in unsere Gleichung einsetzen, berechnet sich die Proteinkonzentration Cbradford wie folgt:

Cbradford = (0,5 - 0,1) / 0,2 = 2 mg/ml

Ausgabe:

• Cbradford = die Konzentration des Proteins in mg/ml

Linearer Bereich und Genauigkeit

Denken Sie daran, dass der Bradford-Test einen bekannten linearen Bereich hat (normalerweise zwischen 1 und 100 µg/ml Protein). Außerhalb dieses Bereichs nimmt die Genauigkeit ab und die Ergebnisse können inkonsistent sein. Dies bedeutet, dass die Steigung k in einem kontrollierten Aufbau unter Verwendung eines Standardproteins wie Rinderserumalbumin (BSA) genau bestimmt werden sollte.

Datenvalidierung und Versuchsbedingungen

Um genaue Ergebnisse zu erhalten, müssen alle Werte unbedingt innerhalb geeigneter Bereiche liegen. Abweichungen, wie z. B. die Verwendung einer anderen Wellenlänge als 595 nm, können die Ergebnisse erheblich verfälschen.

• Messung A595 - Das Spektralphotometer muss vor dem Einführen der Proben auf Null gesetzt werden.
• Sorgen Sie für eine ordnungsgemäße Vorbereitung - Verdünnen Sie die Proben nach Bedarf, um sie innerhalb des messbaren Bereichs zu platzieren.

Häufig gestellte Fragen (FAQs)

• F: Was kann die Messwerte des Bradford-Assays beeinträchtigen?
  A: Detergenzien und hohe Konzentrationen von Reduktionsmitteln können den Assay beeinträchtigen. Für genaue Messungen sollten geeignete Kontrollen einbezogen werden.
• F: Kann die Standardkurve wiederverwendet werden?
  A: Aus Gründen der Zuverlässigkeit sollten Sie bei jeder Durchführung des Tests eine neue Standardkurve erstellen.

Zusammenfassung

Die Bradford-Protein-Assay-Gleichung ist ein unschätzbares Werkzeug in der Biochemie zur Bestimmung der Proteinkonzentration in einer Lösung. Zu den entscheidenden Faktoren, die berücksichtigt werden müssen, gehören die genaue Erstellung der Standardkurve und korrekte Absorptionsmessungen.