Maîtriser le calcul de l'essai de protéine de Bradford pour une quantification précise des protéines

Introduction-au-calcul-de-l'essai-protéique-de-Bradford

L'essai-protéique-de-Bradford-est-une-méthode-rapide-et-précise-pour-déterminer-la-concentration-de-protéines-dans-une-solution.-Cette-technique-est-basée-sur-la-liaison-du-colorant-Coomassie-Brilliant-Blue-aux-protéines,-ce-qui-entraîne-un-changement-de-couleur-qui-peut-être-mesuré-à-l'aide-d'un-spectrophotomètre.-Le-degré-du-changement-de-couleur-est-directement-proportionnel-à-la-concentration-de-protéines.

Comprendre-la-formule

La-formule-utilisée-pour-calculer-la-concentration-de-protéines-est:

• absorbance:-La-valeur-de-l'absorbance-mesurée-à-595-nm-à-l'aide-d'un-spectrophotomètre.
• intercept:-L'ordonnée-à-l'origine-de-la-courbe-standard-générée-pendant-l'essai,-généralement-obtenue-grâce-à-une-analyse-de-régression-linéaire.
• slope:-La-pente-de-la-courbe-standard,-également-obtenue-par-l'analyse-de-régression-linéaire.

Le-résultat,-proteinConcentration,-est-exprimé-en-microgrammes-par-millilitre-(µg/mL).

Exemple-de-calcul

Passons-en-revue-un-exemple-pour-voir-comment-le-calcul-fonctionne-en-pratique:

• Supposons-que-nous-ayons-les-données-suivantes-d'un-essai-protéique-de-Bradford-terminé:
• absorbance-=-0.75
• intercept-=-0.1
• slope-=-1.5

En-utilisant-la-formule,-nous-pouvons-calculer-la-concentration-de-protéines:

Cela-donne:

Exemple-réel

Considérons-un-laboratoire-de-recherche-où-des-scientifiques-travaillent-sur-la-quantification-de-la-quantité-de-protéines-dans-divers-lysats-cellulaires.-Ils-effectuent-un-essai-protéique-de-Bradford-et-trouvent-que-l'absorbance-pour-un-de-leurs-échantillons-est-de-0.65.-D'après-des-expériences-précédentes,-ils-savent-que-l'intercept-est-de-0.08-et-que-la-pente-est-de-1.4.-En-insérant-ces-valeurs-dans-notre-formule:

Cela-donne:

Cette-mesure-rapide-et-précise-permet-aux-chercheurs-de-poursuivre-leurs-expériences,-en-s'assurant-qu'ils-travaillent-avec-les-bonnes-concentrations-de-protéines.

Problèmes-courants-et-gestion-des-erreurs

Il-y-a-quelques-problèmes-courants-qui-peuvent-survenir-lors-de-la-réalisation-d'un-essai-protéique-de-Bradford:

• Mauvaise-génération-de-la-courbe-standard:-Assurez-vous-de-préparer-et-de-mesurer-vos-standards-avec-précision.
• Interférence-par-d'autres-substances:-Soyez-attentif-aux-substances-qui-peuvent-interférer-avec-l'essai,-telles-que-les-détergents.
• Erreurs-de-mesure:-Assurez-vous-que-le-spectrophotomètre-est-correctement-calibré-et-fonctionne-correctement.

Questions-fréquemment-posées-(FAQ)

Q:-Que-faire-si-ma-valeur-d'absorbance-est-en-dehors-de-la-plage-de-la-courbe-standard?

A:-Diluez-votre-échantillon-de-sorte-que-son-absorbance-se-situe-dans-la-plage-de-la-courbe-standard,-puis-recalculez-la-concentration.

Q:-Puis-je-utiliser-une-longueur-d'onde-différente-pour-l'essai-de-Bradford?

A:-L'essai-protéique-de-Bradford-est-spécifiquement-conçu-pour-mesurer-l'absorbance-à-595-nm.-Utiliser-une-longueur-d'onde-différente-peut-entraîner-des-résultats-inexacts.

Q:-Comment-assurer-l'exactitude-de ma courbe standard?

A: Préparez des standards frais chaque fois que vous réalisez l'essai et mesurez les avec précision. Utilisez plusieurs réplicats et faites la moyenne des résultats.

Tags: Biochimie, Dosage de protéines, Méthodes de laboratoire