Comprendre l'Équation du test de protéine de Bradford : Un guide complet

Comprendre-l'équation-du-dosage-protéique-de-Bradford

Le-dosage-protéique-de-Bradford-est-une-procédure-analytique-spectroscopique-rapide-et-précise-utilisée-pour-mesurer-la-concentration-de-protéines-dans-une-solution.-Voici-la-répartition-:

• Cbradford-est-la-concentration-de-la-protéine-(mg/mL).
• A595-est-la-lecture-d'absorbance-de-l'échantillon-à-595-nm.
• Ablank-est-la-lecture-d'absorbance-du-blanc-(pas-de-protéine).
• k-est-la-pente-dérivée-de-la-courbe-standard-(mg/(mL-*-absorbance)).

Utilisation-des-paramètres-:-Exemples-et-interprétations

Imaginez-que-vous-avez-une-solution-d'échantillon-et-que-vous-la-placiez-dans-un-spectrophotomètre.-L'absorbance-à-595-nm-a-été-enregistrée-à-0,5,-et-pour-le-blanc,-elle-était-de-0,1.-La-pente-de-la-courbe-standard-BSA-(k)-est-de-0,2-mg/mL-par-unité-d'absorbance.-En-insérant-ceci-dans-notre-équation,-la-concentration-de-la-protéine-Cbradford-serait-calculée-comme-suit-:

Cbradford-=-(0,5---0,1)-/-0,2-=-2-mg/mL

Résultat-:

• Cbradford-=-la-concentration-de-la-protéine-en-mg/mL

Plage-linéaire-et-précision

N'oubliez-pas-que-le-dosage-de-Bradford-a-une-plage-linéaire-connue-(généralement-entre-1-100-µg/mL-de-protéine).-Au-delà-de-cette-plage,-la-précision-diminue-et-les-résultats-peuvent-être-incohérents.-Cela-signifie-que-la-pente-k-doit-être-déterminée-avec-précision-dans-un-environnement-contrôlé-en-utilisant-une-protéine-standard-telle-que-l'Albumine-Sérique-Bovine-(BSA).

Validation-des-données-et-conditions-expérimentales

Il-est-essentiel-d'avoir-toutes-les-valeurs-dans-les-plages-appropriées-pour-obtenir-des-résultats-précis.-Les-écarts,-tels-que-l'utilisation-d'une-longueur-d'onde-différente-de-595-nm,-peuvent-fausser-considérablement-les-résultats.

• Mesurer-A595---Le-spectrophotomètre-doit-être-mis-à-zéro-avant-d'insérer-les-échantillons.
• Assurer-une-préparation-adéquate---Diluer-les-échantillons-si-nécessaire-pour-les-placer-dans-la-plage-mesurable.

Questions-fréquemment-posées-(FAQ)

• Q-:-Qu'est-ce-qui-peut-interférer-avec-les-lectures-du-dosage-de-Bradford-?
  A-:-Les-détergents-et-les-niveaux-élevés-d'agents-réducteurs-peuvent-interférer-avec-le-dosage.-Des-contrôles-adéquats-doivent-être-inclus-pour-des-mesures-précises.
• Q-:-La-courbe-standard-peut-elle-être-réutilisée-?
  A-:-Pour-plus-de-fiabilité,-générez-une-nouvelle-courbe-standard-à-chaque-fois-que-vous-effectuez-le-dosage.

Résumé

L'équation-du-dosage-protéique-de-Bradford-est-un-outil-précieux-en-biochimie pour déterminer la concentration de protéines dans une solution. Les facteurs critiques à considérer incluent la génération précise de la courbe standard et des mesures d'absorbance correctes.

Tags: Biochimie, Dosage des protéines, Techniques de laboratoire