प्रोटीन की सटीक मात्रा के लिए ब्रैडफोर्ड प्रोटीन जांच गणना में महारत हासिल करना
सूत्र:प्रोटीन सांद्रता = (अवशोषण - अवरोधन) / ढलान
ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख गणना का परिचय
ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख एक घोल में प्रोटीन की सांद्रता निर्धारित करने के लिए एक तेज़ और सटीक विधि है। यह तकनीक प्रोटीन के लिए कूमासी ब्रिलियंट ब्लू डाई के बंधन पर आधारित है, जिससे रंग परिवर्तन होता है जिसे स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके मापा जा सकता है। रंग परिवर्तन की डिग्री प्रोटीन सांद्रता के सीधे आनुपातिक है।
सूत्र को समझना
प्रोटीन सांद्रता की गणना के लिए उपयोग किया जाने वाला सूत्र है:
प्रोटीन सांद्रता = (अवशोषण - अवरोधन) / ढलान- अवशोषण: स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके 595 एनएम पर मापा गया अवशोषण मूल्य।
- अवरोधन: परख के दौरान उत्पन्न मानक वक्र से y-अवरोधन, आमतौर पर एक रैखिक प्रतिगमन विश्लेषण से प्राप्त होता है।
- ढलान: मानक वक्र का ढलान, जो रैखिक प्रतिगमन विश्लेषण से भी प्राप्त होता है।
परिणाम, प्रोटीन सांद्रता, माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर में व्यक्त किया जाता है (µg/mL).
उदाहरण गणना
चलिए एक उदाहरण के ज़रिए देखते हैं कि गणना व्यवहार में कैसे काम करती है:
- मान लें कि हमारे पास एक पूर्ण ब्रैडफ़ोर्ड प्रोटीन परख से निम्नलिखित डेटा है:
अवशोषण= 0.75अवरोधन= 0.1ढलान= 1.5
सूत्र का उपयोग करके, हम प्रोटीन सांद्रता की गणना कर सकते हैं:
प्रोटीन सांद्रता = (0.75 - 0.1) / 1.5इसका परिणाम यह होता है:
प्रोटीन सांद्रता = 0.43 µg/mL.वास्तविक जीवन उदाहरण
एक शोध प्रयोगशाला पर विचार करें जहाँ वैज्ञानिक विभिन्न सेल लाइसेट्स में प्रोटीन की मात्रा निर्धारित करने पर काम कर रहे हैं। वे ब्रैडफ़ोर्ड प्रोटीन परख करते हैं और पाते हैं कि उनके नमूनों में से एक के लिए अवशोषण 0.65 है। पिछले प्रयोगों से, वे जानते हैं कि अवरोधन 0.08 है और ढलान 1.4 है। इन मानों को हमारे सूत्र में डालें:
प्रोटीन सांद्रता = (0.65 - 0.08) / 1.4इसका परिणाम यह होगा:
प्रोटीन सांद्रता = 0.41 µg/mL.यह त्वरित और सटीक माप शोधकर्ताओं को उनके प्रयोगों के साथ आगे बढ़ने में मदद करता है, यह सुनिश्चित करते हुए कि वे सही प्रोटीन सांद्रता के साथ काम कर रहे हैं।
सामान्य मुद्दे और हैंडलिंग त्रुटियाँ
ब्रैडफ़ोर्ड प्रोटीन परख करते समय कुछ सामान्य मुद्दे उत्पन्न हो सकते हैं:
- गलत मानक वक्र निर्माण: सुनिश्चित करें कि आप अपने मानकों को सही ढंग से तैयार और मापते हैं।
- अन्य पदार्थों द्वारा हस्तक्षेप: उन पदार्थों से सावधान रहें जो परख में हस्तक्षेप कर सकते हैं, जैसे डिटर्जेंट।
- मापन त्रुटियाँ: सुनिश्चित करें कि स्पेक्ट्रोफोटोमीटर ठीक से कैलिब्रेटेड है और सही ढंग से काम कर रहा है।
अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न (FAQ)
प्रश्न: यदि मेरा अवशोषण मान मानक वक्र की सीमा से बाहर है तो क्या होगा?
उत्तर: अपने नमूने को इस तरह पतला करें कि उसका अवशोषण मानक वक्र की सीमा के भीतर आ जाए और फिर सांद्रता की पुनः गणना करें।
प्रश्न: क्या मैं ब्रैडफ़ोर्ड परख के लिए एक अलग तरंग दैर्ध्य का उपयोग कर सकता हूँ?
उत्तर: ब्रैडफ़ोर्ड प्रोटीन परख को विशेष रूप से 595 एनएम पर अवशोषण को मापने के लिए डिज़ाइन किया गया है। एक अलग तरंग दैर्ध्य का उपयोग करने से गलत परिणाम हो सकते हैं।
प्रश्न: मैं अपने मानक वक्र की सटीकता कैसे सुनिश्चित करूँ?
उत्तर: हर बार जब आप परख करते हैं तो नए मानक तैयार करें और उन्हें सटीक रूप से मापें। कई प्रतिकृतियों का उपयोग करें और परिणामों का औसत निकालें।