प्रोटीन की सटीक मात्रा के लिए ब्रैडफोर्ड प्रोटीन जांच गणना में महारत हासिल करना

ब्रैडफोर्ड प्रोटीन असाइन कैलकुलेशन की भूमिका

ब्रैडफोर्ड प्रोटीन असाइन एक त्वरित और सटीक विधि है जिसका उपयोग एक समाधान में प्रोटीन की सांद्रता को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। यह तकनीक प्रोटीन के साथ कूमा्सी ब्रिलियंट ब्लू रंग से बंधन पर आधारित है, जो एक रंग परिवर्तन की ओर ले जाती है जिसे स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके मापा जा सकता है। रंग परिवर्तन की डिग्री सीधे प्रोटीन सांद्रता के अनुपाती होती है।

सूत्र को समझना

प्रोटीन सांद्रता की गणना के लिए प्रयुक्त सूत्र है:

• अवशोषणएक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके 595 एनएम पर मापी गई अवशोषण मान।
• अवरोधपरीक्षण के दौरान उत्पन्न मानक वक्र से y-intercept, सामान्यत: एक रैखिक प्रतिगमन विश्लेषण से प्राप्त किया जाता है।
• ढलानमानक वक्र की ढाल, जो रैखिक प्रतिगमन विश्लेषण से भी प्राप्त होती है।

परिणाम, प्रोटीन सांद्रतामाइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर (µg/mL) में व्यक्त किया जाता है।

उदाहरण गणना

चलो एक उदाहरण के माध्यम से दिखते हैं कि गणना कैसे व्यवहार में काम करती है:

• मान लीजिए कि हमारे पास एक पूर्ण ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परीक्षण से डेटा है:
• अवशोषण = 0.75
• अवरोध = 0.1
• ढलान = 1.5

फार्मूले का उपयोग करके, हम प्रोटीन सांद्रता की गणना कर सकते हैं:

इसका परिणाम है:

वास्तविक जीवन का उदाहरण

एक शोध प्रयोगशाला पर ध्यान दें जहां वैज्ञानिक विभिन्न सेल लाइसेट में प्रोटीन की मात्रा को मापने पर काम कर रहे हैं। वे एक ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परीक्षण करते हैं और उनके एक नमूने के लिए अवशोषण 0.65 होने का पता लगाते हैं। पिछले प्रयोगों से, वे जानते हैं कि अवरोध 0.08 है और ढलान 1.4 है। इन मानों को हमारे सूत्र में डालते हैं:

इसका परिणाम है:

यह तेज़ और सटीक माप अनुसंधानकर्ताओं को उनके प्रयोगों के साथ आगे बढ़ने में मदद करता है, यह सुनिश्चित करते हुए कि वे सही प्रोटीन सांद्रता के साथ काम कर रहे हैं।

सामान्य समस्याएँ और त्रुटियों को संभालना

ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परीक्षा करने के दौरान कुछ सामान्य समस्याएँ हो सकती हैं:

• गलत मानक वक्र उत्पादनसुनिश्चित करें कि आप अपने मानकों को सही ढंग से तैयार और मापें।
• अन्य पदार्थों द्वारा हस्तक्षेपपरिक्षण में हस्तक्षेप कर सकने वाली पदार्थों के प्रति जागरूक रहें, जैसे की डिटर्जेंट।
• मापन त्रुटियाँसुनिश्चित करें कि स्पेक्ट्रोफोटोमीटर सही ढंग से कैलिब्रेटेड है और सही ढंग से कार्य कर रहा है।

अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न (FAQs)

Q: यदि मेरा अवशोषण मूल्य मानक वक्र के दायरे के बाहर है तो क्या होगा?

अपने नमूने को इस प्रकार पतला करें कि इसका अवशोषण मान मानक वक्र की सीमा के भीतर आ जाए और फिर केंद्रितता की पुनः गणना करें।

प्रश्न: क्या मैं ब्रैडफोर्ड टेस्ट के लिए एक अलग तरंगदैर्ध्य का उपयोग कर सकता हूँ?

A: ब्रैडफोर्ड प्रोटीन असेस विशेष रूप से 595 एनएम पर अवशोषण मापन के लिए डिज़ाइन किया गया है। एक अलग तरंगदैर्ध्य का उपयोग करने से गलत परिणाम मिल सकते हैं।

प्रमाणित वक्र की सटीकता सुनिश्चित करने के लिए मुझे क्या करना चाहिए?

A: हर बार परीक्षण करने पर ताजे मानकों को तैयार करें और उन्हें सटीकता से मापें। कई पुनरावृत्तियों का उपयोग करें और परिणामों का औसत निकालें।