ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख समीकरण को समझना: एक व्यापक मार्गदर्शिका
सूत्र:- ब्रैडफोर्ड-प्रोटीन-एस्से-एक-त्वरित-और-सटीक-स्पेक्ट्रोस्कोपिक-विश्लेषणात्मक-प्रक्रिया-है-जिसका-उपयोग-एक-समाधान-में-प्रोटीन-की-सांद्रता-को-मापने-के-लिए-किया-जाता-है।-यहां-टूट-फूट-का-विवरण-दिया-गया-है: कल्पना-कीजिए-कि-आपके-पास-एक-नमूने-का-समाधान-है,-और-आपने-इसे-एक-स्पेक्ट्रोफोटोमीटर-में-रखा।-595-नैनोमीटर-पर-अवशोषण-को-0.5-के-रूप-में-दर्ज-किया-गया,-और-ब्लैंक-के-लिए-यह-0.1-था।-बीएसए-मानक-वक्र-(k)-से-प्राप्त-ढलान-0.2-मिलीग्राम/मिलीलीटर-प्रति-अवशोषण-इकाई-है।-इसको-हमारे-समीकरण-में-डालने-पर,-प्रोटीन-सांद्रता- यह-ध्यान-रखना-महत्वपूर्ण-है-कि-ब्रैडफोर्ड-एस्से-की-एक-प्रचलित-लाइनियर-रेंज-होती-है-(आमतौर-पर-1-100-माइक्रोग्राम/मिलीलीटर-प्रोटीन)।-इस-सीमा-से-परे,-सटीकता-घटती-है-और-परिणाम-असंगत-हो-सकते-हैं।-इसका-मतलब-है-कि-ढलान-k-को-मानक-प्रोटीन-जैसे-बायोवाइन-सीरम-एल्ब्यूमिन-(बीएसए)-का-उपयोग-करके-एक-नियंत्रित-सेटअप-में-सटीक-रूप-से-निर्धारित-किया-जाना-चाहिए। सटीक-परिणाम-प्राप्त-करने-के-लिए-सभी-मानों-का-उपयुक्त-दायरे-में-होना-आवश्यक-है।-विचलन,-जैसे-595-नैनोमीटर-के-अलावा-किसी-अन्य-तरंगदैर्ध्य-का-उपयोग-करने-से-परिणाम-विशेष-रूप-से-गलत-हो-सकते-हैं। ब्रैडफोर्ड प्रोटीन एस्से समीकरण एक समाधान में प्रोटीन सांद्रता निर्धारण के लिए जैव रसायन में एक अमूल्य उपकरण है। विचार किए जाने वाले महत्वपूर्ण कारकों में सटीक मानक वक्र उत्पत्ति और सही अवशोषण माप शामिल हैं।Cब्रैडफोर्ड-=-(A595---Aखाली)-/-k
ब्रैडफोर्ड-प्रोटीन-एस्से-समीकरण-को-समझना
Cब्रैडफोर्ड
-प्रोटीन-की-सांद्रता-है-(मिलीग्राम/मिलीलीटर)।A595
-नमूने-की-595-नैनोमीटर-पर-की-गई-अवशोषण-रीडिंग-है।Aखाली
-ब्लैंक-(कोई-प्रोटीन-नहीं)-की-अवशोषण-रीडिंग-है।k
-मानक-वक्र-से-प्राप्त-ढलान-है-(मिलीग्राम/(मिलीलीटर-*-अवशोषण)).पैरामीटर्स-का-उपयोग:-उदाहरण-और-व्याख्याएं
Cब्रैडफोर्ड
-निम्नलिखित-रूप-में-गणना-की-जाएगी:Cब्रैडफोर्ड-=-(0.5---0.1)-/-0.2-=-2-मिलीग्राम/मिलीलीटर
परिणाम:
Cब्रैडफोर्ड
-=-मिलीग्राम/मिलीलीटर-में-प्रोटीन-की-सांद्रतालिनियर-रेंज-और-सटीकता
डेटा-वैलिडेशन-और-प्रयोगात्मक-स्थितियां
A595
---नमूनों-को-डालने-से-पहले-स्पेक्ट्रोफोटोमीटर-को-शून्य-पर-सेट-करें।अक्सर-पूछे-जाने-वाले-प्रश्न-(FAQs)
उत्तर:-डिटर्जेंट-और-उच्च-स्तर-के-रिड्यूसिंग-एजेंट्स-एस्से-के-साथ-हस्तक्षेप-कर-सकते-हैं।-सटीक-मापों-के-लिए-सही-नियंत्रण-शामिल-किया-जाना-चाहिए।
उत्तर:-विश्वसनीयता-के-लिए,-हर-बार-एस्से-करते-समय-एक-नया-मानक-वक्र उत्पन्न करें।सारांश
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