ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख समीकरण को समझना: एक व्यापक मार्गदर्शिका

ब्रैडफोर्ड प्रोटीन असाइन समीकरण को समझना

ब्रैडफ़ोर्ड प्रोटीन असेसमेंट एक तेज़ और सटीक स्पेक्ट्रोस्कोपिक एनालिटिकल प्रक्रिया है जिसका उपयोग किसी घोल में प्रोटीन की सांद्रता को मापने के लिए किया जाता है। यहाँ उसका विवरण है:

• सीब्रैडफोर्ड यह प्रोटीन की सांद्रता है (मिलीग्राम/मिलीलीटर).
• ए595 क्या नमूने का अवशोषण पढ़ाई 595 एनएम पर है।
• एखाली ब्लैंक (कोई प्रोटीन नहीं) का अवशोषण पढ़ना है।
• क क्या ढलान मानक वक्र (mg/(mL * अवशोषण)) से व्युत्पन्न होता है?

पैरामीटर का उपयोग: उदाहरण और व्याख्याएँ

कलपना करें कि आपके पास एक नमूना समाधान है, और आपने इसे एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर में रखा है। वह अवशोषण 595 नैनोमीटर पर 0.5 दर्ज किया गया था, और खाली के लिए, यह 0.1 था। BSA मानक वक्र से ढलान (यहाँ पर नष्ट नहीं किया जाएगा)क0.2 mg/mL प्रतिगमन इकाई प्रति है। इसे हमारे समीकरण में लगाते हुए, प्रोटीन की सांद्रता सीब्रैडफोर्ड इस प्रकार से गणना की जाएगी:

सीब्रैडफोर्ड = (0.5 - 0.1) / 0.2 = 2 मिलीग्राम/मिलीलीटर

{

• सीब्रैडफोर्ड = प्रोटीन की सांद्रता mg/mL में

लीनियर रेंज और सटीकता

यह ध्यान में रखें कि ब्रैडफोर्ड परीक्षण की एक ज्ञात रेखीय सीमा होती है (आमतौर पर प्रोटीन के 1-100 µg/mL के बीच)। इस सीमा से परे, सटीकता कम हो जाती है, और परिणाम असंगत हो सकते हैं। इसका मतलब है कि ढाल क एक नियंत्रित सेटअप में एक मानक प्रोटीन जैसे कि बोवाइन सीरम एल्ब्यूमिन (BSA) का उपयोग करके सटीकता से निर्धारित किया जाना चाहिए।

डेटा मान्यता और प्रयोगात्मक स्थितियाँ

सटीक परिणाम प्राप्त करने के लिए सभी मानों को उपयुक्त सीमाओं के भीतर होना आवश्यक है। विचलन, जैसे कि 595 एनएम के अलावा किसी अन्य तरंग दैर्ध्य का उपयोग करना, परिणामों को काफी हद तक प्रभावित कर सकता है।

• मापें ए595 स्पेक्ट्रोफोटोमीटर को नमूने डालने से पहले शून्य किया जाना चाहिए।
• सही तैयारी सुनिश्चित करें - मापने योग्य सीमा के भीतर रखने के लिए आवश्यकतानुसार नमूनों को पतला करें।

अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न (FAQs)

• प्रश्न: ब्रैडफोर्ड एसे की रीडिंग के साथ क्या हस्तक्षेप कर सकता है?
  A: डिटर्जेंट्स और उच्च स्तर के कमी करने वाले एजेंट परीक्षण में हस्तक्षेप कर सकते हैं। सटीक माप के लिए उचित नियंत्रण शामिल किए जाने चाहिए।
• प्रश्न: क्या मानक वक्र का पुनः उपयोग किया जा सकता है?
  A: विश्वसनीयता के लिए, हर बार परीक्षण करते समय एक नया मानक वक्र उत्पन्न करें।

सारांश

ब्रैडफोर्ड प्रोटीन आसाइ समीकरण जैव रसायन में एक अमूल्य उपकरण है, जिसका उपयोग समाधान में प्रोटीन की सांद्रता का निर्धारण करने के लिए किया जाता है। महत्वपूर्ण कारकों में सटीक मानक वक्र निर्माण और सही अवशोषण माप शामिल हैं।