Padroneggiare il calcolo del dosaggio proteico Bradford per una quantificazione accurata delle proteine
Formula: Il-saggio-proteico-di-Bradford-è-un-metodo-rapido-e-accurato-per-determinare-la-concentrazione-delle-proteine-in-una-soluzione.-Questa-tecnica-si-basa-sul-legame-del-colorante-Coomassie-Brilliant-Blue-alle-proteine,-che-porta-a-un-cambiamento-di-colore-misurabile-con-uno-spettrofotometro.-Il-grado-di-cambiamento-del-colore-è-direttamente-proporzionale-alla-concentrazione-delle-proteine. La-formula-usata-per-calcolare-la-concentrazione-delle-proteine-è: Il-risultato,-concentrazioneDiProteine,-è-espresso-in-microgrammi-per-millilitro-(µg/mL). Vediamo-un-esempio-per-capire-come-funziona-il-calcolo-nella-pratica: Utilizzando-la-formula,-possiamo-calcolare-la-concentrazione-delle-proteine: Questo-risulta-in: Consideriamo-un-laboratorio-di-ricerca-dove-gli-scienziati-stanno-quantificando-la-quantità-di-proteine-in-vari-lisati-cellulari.-Eseguono-un-saggio-proteico-di-Bradford-e-trovano-che-l'assorbanza-per-uno-dei-loro-campioni-è-0.65.-Da-esperimenti-precedenti,-sanno-che-l'intercetta-è-0.08-e-la-pendenza-è-1.4.-Inserendo-questi-valori-nella-nostra-formula: Questo-risulta-in: Questa-misura-rapida-e-accurata-aiuta-i-ricercatori-a-proseguire-con-i-loro-esperimenti,-assicurandosi-di-lavorare-con-le-corrette-concentrazioni-proteiche. Ci-sono-alcuni-problemi-comuni-che-possono-sorgere-durante-l'esecuzione-di-un-saggio-proteico-di-Bradford: R:-Diluire-il-campione-in-modo-che-l'assorbanza-rientri-nel-range-della-curva-standard-e-ricalcolare-la-concentrazione. R:-Il-saggio-proteico-di-Bradford-è-specificamente-progettato-per-misurare-l'assorbanza-a-595-nm.-Usare-una-lunghezza-d'onda-diversa-può-portare-a-risultati-inaccurati. R: Preparare standard freschi ogni volta che si esegue il saggio e misurarli con precisione. Usare replicati multipli e fare la media dei risultati.concentrazioneDiProteine-=-(assorbanza---intercetta)-/-pendenza
Introduzione-al-calcolo-del-saggio-proteico-di-Bradford
Comprensione-della-Formula
concentrazioneDiProteine-=-(assorbanza---intercetta)-/-pendenza
Calcolo-di-Esempio
assorbanza
-=-0.75intercetta
-=-0.1pendenza
-=-1.5concentrazioneDiProteine-=-(0.75---0.1)-/-1.5
concentrazioneDiProteine-=-0.43-µg/mL.
Esempio-di-Vita-Reale
concentrazioneDiProteine-=-(0.65---0.08)-/-1.4
concentrazioneDiProteine-=-0.41-µg/mL.
Problemi-Comuni-e-Gestione-degli-Errori
Domande-Frequenti-(FAQs)
D:-Cosa-fare-se-il-mio-valore-di-assorbanza-è-fuori-dal-range-della-curva-standard?
D:-Posso-usare-una-lunghezza-d'onda-diversa-per-il-saggio-di-Bradford?
D:-Come-posso-assicurarmi-dell'accuratezza della mia curva standard?