Comprendere l'Equazione del Saggio di Proteine di Bradford: Una Guida Completa

Comprendere l'equazione del test di proteine di Bradford

L'Assay di Bradford per le proteine è una procedura analitica spettrale rapida e accurata utilizzata per misurare la concentrazione di proteine in una soluzione. Ecco la suddivisione:

• Cbradford è la concentrazione della proteina (mg/mL).
• A595 è la lettura dell'assorbanza del campione a 595 nm.
• Avuoto è la lettura di assorbanza del campione di controllo (senza proteine).
• k è la pendenza derivata dalla curva standard (mg/(mL * assorbanza)).

Utilizzo dei parametri: esempi e interpretazioni

Immagina di avere una soluzione campione e di averla posizionata in uno spettrofotometro. Il assorbanza a 595 nm è stata registrata a 0,5, e per il bianco, era 0,1. La pendenza dalla curva standard BSA (kè di 0,2 mg/mL per unità di assorbimento. Inserendo questo nella nostra equazione, la concentrazione di proteine Cbradford sarebbe calcolato come segue:

Cbradford = (0,5 - 0,1) / 0,2 = 2 mg/mL

{

• Cbradford = la concentrazione della proteina in mg/mL

Intervallo Lineare e Precisione

Tieni presente che il test di Bradford ha un intervallo lineare noto (di solito tra 1-100 µg/mL di proteine). Al di là di questo intervallo, la precisione diminuisce e i risultati possono essere incoerenti. Ciò significa che la pendenza k dovrebbe essere determinato con precisione in un ambiente controllato utilizzando una proteina standard come l'albumina bovina (BSA).

Validazione dei dati e condizioni sperimentali

È essenziale avere tutti i valori all'interno degli intervalli appropriati per ottenere risultati accurati. Le deviazioni, come l'uso di una lunghezza d'onda diversa da 595 nm, possono distorcere significativamente i risultati.

• Misura A595 Il spettrofotometro deve essere azzerato prima di inserire i campioni.
• Assicurati di una preparazione adeguata - Diluisci i campioni secondo necessità per rientrare nell'intervallo misurabile.

Domande Frequenti (FAQ)

• D: Cosa può interferire con le letture del saggio Bradford?
  A: I detergenti e alti livelli di agenti riducenti possono interferire con l'analisi. Dovrebbero essere inclusi controlli adeguati per misurazioni accurate.
• D: La curva standard può essere riutilizzata?
  A: Per affidabilità, genera una nuova curva standard ogni volta che esegui l'analisi.

Riassunto

L'equazione dell'analisi proteica di Bradford è uno strumento inestimabile nella biochimica per determinare la concentrazione di proteine in una soluzione. Fattori critici da considerare includono la generazione accurata della curva standard e le corrette misurazioni dell'assorbanza.