ブラッドフォードたんぱく質アッセイ計算をマスターして正確なたんぱく質定量化を行う
式: ブラッドフォードタンパク質アッセイは、溶液中のタンパク質濃度を迅速かつ正確に決定する方法です。この技術は、クームシーブリリアントブルー染料がタンパク質に結合することを基にしており、これにより分光光度計を使用して測定できる色の変化が生じます。色の変化の程度はタンパク質濃度に直接比例します。 タンパク質濃度を計算するために使用される式は次の通りです: 結果であるタンパク質濃度は、マイクログラム毎ミリリットル(µg/mL)で表されます。 計算が実際にどのように機能するかを見るための例を見てみましょう: 式を使用してタンパク質濃度を計算できます: その結果は次のようになります: 研究室において、科学者たちがさまざまな細胞溶解物中のタンパク質量を定量化するために作業しているとします。彼らはブラッドフォードタンパク質アッセイを実施し、サンプルの1つの吸光度が0.65であることを見つけます。以前の実験から、切片が0.08で傾きが1.4であることがわかっています。これらの値を式に代入します: その結果は次のようになります: この迅速かつ正確な測定により、研究者たちは実験を進め、正しいタンパク質濃度で作業していることを確認できます。 ブラッドフォードタンパク質アッセイを行う際に発生する可能性のある一般的な問題には以下があります: A: 吸光度が標準曲線の範囲内に収まるようにサンプルを希釈し、再計算してください。 A: ブラッドフォードタンパク質アッセイは特に595 nmでの吸光度を測定するように設計されています。別の波長を使用すると、正確な結果が得られない可能性があります。 A: アッセイを行うたびに新鮮な標準物質を調製し、正確に測定してください。複数のレプリケートを使用して結果を平均化します。タンパク質濃度-=-(吸光度---切片)-/-傾き
ブラッドフォードタンパク質アッセイ計算の紹介
式の理解
タンパク質濃度-=-(吸光度---切片)-/-傾き
例の計算
吸光度
-=-0.75切片
-=-0.1傾き
-=-1.5タンパク質濃度-=-(0.75- 0.1) / 1.5
タンパク質濃度 = 0.43 µg/mL
実際の例
タンパク質濃度 = (0.65 0.08) / 1.4
タンパク質濃度 = 0.41 µg/mL
一般的な問題とエラーの対処
よくある質問 (FAQs)
Q: 吸光度値が標準曲線の範囲外であった場合はどうすればよいですか?
Q: ブラッドフォードアッセイに他の波長を使用できますか?
Q: 標準曲線の精度をどのように確保すればよいですか?
Tags: 生化学, タンパク質アッセイ, ラボラトリー メソッド