ブラッドフォードたんぱく質アッセイ計算をマスターして正確なたんぱく質定量化を行う

ブラッドフォードタンパク質アッセイ計算の紹介

ブラッドフォードタンパク質アッセイは、溶液中のタンパク質濃度を迅速かつ正確に決定する方法です。この技術は、クームシーブリリアントブルー染料がタンパク質に結合することを基にしており、これにより分光光度計を使用して測定できる色の変化が生じます。色の変化の程度はタンパク質濃度に直接比例します。

式の理解

タンパク質濃度を計算するために使用される式は次の通りです:

• 吸光度:-分光光度計を使用して595-nmで測定された吸光度値。
• 切片:-通常、線形回帰分析から得られるアッセイ中に生成される標準曲線のy切片。
• 傾き:-同じく線形回帰分析から得られる標準曲線の傾き。

結果であるタンパク質濃度は、マイクログラム毎ミリリットル（µg/mL）で表されます。

例の計算

計算が実際にどのように機能するかを見るための例を見てみましょう:

• 次のデータが完了したブラッドフォードタンパク質アッセイから得られるとします:
• 吸光度-=-0.75
• 切片-=-0.1
• 傾き-=-1.5

式を使用してタンパク質濃度を計算できます:

その結果は次のようになります:

実際の例

研究室において、科学者たちがさまざまな細胞溶解物中のタンパク質量を定量化するために作業しているとします。彼らはブラッドフォードタンパク質アッセイを実施し、サンプルの1つの吸光度が0.65であることを見つけます。以前の実験から、切片が0.08で傾きが1.4であることがわかっています。これらの値を式に代入します:

その結果は次のようになります:

この迅速かつ正確な測定により、研究者たちは実験を進め、正しいタンパク質濃度で作業していることを確認できます。

一般的な問題とエラーの対処

ブラッドフォードタンパク質アッセイを行う際に発生する可能性のある一般的な問題には以下があります:

• 標準曲線生成の間違い: 標準物質を正確に調製および測定することを確認してください。
• 他の物質による干渉: 洗剤などアッセイに干渉する物質に注意してください。
• 測定エラー: 分光光度計が適切に校正され、正しく作動していることを確認してください。

よくある質問 (FAQs)

Q: 吸光度値が標準曲線の範囲外であった場合はどうすればよいですか?

A: 吸光度が標準曲線の範囲内に収まるようにサンプルを希釈し、再計算してください。

Q: ブラッドフォードアッセイに他の波長を使用できますか?

A: ブラッドフォードタンパク質アッセイは特に595 nmでの吸光度を測定するように設計されています。別の波長を使用すると、正確な結果が得られない可能性があります。

Q: 標準曲線の精度をどのように確保すればよいですか?

A: アッセイを行うたびに新鮮な標準物質を調製し、正確に測定してください。複数のレプリケートを使用して結果を平均化します。

Tags: 生化学, タンパク質アッセイ, ラボラトリー メソッド