ブラッドフォードタンパク質アッセイ方程式の理解：包括的ガイド

Bradford タンパク質アッセイ方程式の理解

Bradford タンパク質アッセイは、溶液中のタンパク質の濃度を測定するために使用される、迅速かつ正確な分光分析手順です。内訳は次のとおりです。

• Cbradford は、タンパク質の濃度 (mg/mL) です。
• A595 は、サンプルの 595 nm での吸光度です。
• Ablank は、ブランク (タンパク質なし) の吸光度です。
• k は、標準曲線から得られた傾きです (mg/(mL * 吸光度))。

パラメーターの利用: 例と解釈

サンプル溶液があり、それを分光光度計に置いたとします。595 nm での 吸光度 は 0.5 と記録され、ブランクでは 0.1 でした。BSA 標準曲線の傾き (k) は、吸光度単位あたり 0.2 mg/mL です。これを方程式に代入すると、タンパク質濃度 Cbradford は次のように計算されます:

Cbradford = (0.5 - 0.1) / 0.2 = 2 mg/mL

出力:

• Cbradford = mg/mL 単位のタンパク質濃度

線形範囲と精度

Bradford アッセイには既知の線形範囲 (通常は 1 ～ 100 µg/mL のタンパク質) があることに留意してください。この範囲を超えると、精度が低下し、結果に一貫性がなくなる可能性があります。つまり、傾き k は、ウシ血清アルブミン (BSA) などの標準タンパク質を使用して、制御された設定で正確に決定する必要があります。

データ検証と実験条件

正確な結果を得るには、すべての値が適切な範囲内にあることが重要です。595 nm 以外の異なる波長を使用するなどの偏差により、結果が大幅に歪む可能性があります。

• A595 を測定 - サンプルを挿入する前に分光光度計をゼロにする必要があります。
• 適切な準備 - 必要に応じてサンプルを希釈し、測定範囲内に収めます。

よくある質問 (FAQ)

• Q: Bradford アッセイの読み取りを妨げるものは何ですか?
  A: 洗剤や高濃度の還元剤はアッセイを妨げる可能性があります。正確な測定には、適切なコントロールを含める必要があります。
• Q: 標準曲線は再利用できますか?
  A: 信頼性を確保するには、アッセイを実行するたびに新しい標準曲線を作成してください。

概要

ブラッドフォード タンパク質アッセイ方程式は、溶液中のタンパク質濃度を決定するための生化学の貴重なツールです。考慮すべき重要な要素には、正確な標準曲線の作成と正しい吸光度測定が含まれます。