ブラッドフォードタンパク質アッセイ方程式の理解：包括的ガイド

ブラッドフォードタンパク質アッセイの方程式の理解

ブラッドフォードタンパク質定量法は、溶液中のタンパク質濃度を測定するために使用される迅速かつ正確な分光分析手法です。以下はその内訳です：

• シーブラッドフォード これはタンパク質の濃度です (mg/mL)。
• エー595 サンプルの吸光度は595 nmです。
• エー空白 ブランク（タンパク質なし）の吸光度測定値です。
• k 標準曲線から導出された傾きは、mg/(mL * 吸光度)です。

パラメータの利用: 例と解釈

サンプル溶液を用意し、それを分光光度計にセットしました。 吸光度 595 nmでの値は0.5で、ブランクは0.1でした。BSA標準曲線の傾きは（kは吸光度単位あたり0.2 mg/mLです。これを方程式に代入すると、プロテイン濃度は シーブラッドフォード 次のように計算されます:

シーブラッドフォード = (0.5 - 0.1) / 0.2 = 2 mg/mL

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• シーブラッドフォード = 濃度（mg/mL単位）でのタンパク質の量

リニアレンジと精度

ブラッドフォードアッセイには既知の線形範囲があることに注意してください（通常、1〜100 µg/mLのタンパク質の範囲です）。この範囲を超えると、精度が低下し、結果が不一致になる可能性があります。これは、傾き k 制御された設定で、牛血清アルブミン（BSA）などの標準タンパク質を使用して、正確に決定する必要があります。

データ検証および実験条件

正確な結果を得るには、すべての値が適切な範囲内にあることが不可欠です。595 nm以外の異なる波長を使用するなどの偏差は、結果を大きく歪める可能性があります。

• 測定 エー595 分光光度計は、サンプルを挿入する前にゼロ調整を行う必要があります。
• 適切な準備を行ってください - 測定可能な範囲内に収めるために、サンプルを必要に応じて希釈します。

よくある質問 (FAQ)

• Q: ブラッドフォードアッセイの測定値に干渉する可能性があるものは何ですか？
  A: 界面活性剤および高濃度の還元剤は、アッセイに干渉する可能性があります。正確な測定のためには、適切なコントロールを含めるべきです。
• Q: 標準曲線は再利用できますか？
  A: 信頼性のために、アッセイを実施するたびに新しい標準曲線を生成してください。

要約

ブラッドフォード蛋白質アッセイ方程式は、生化学において溶液中の蛋白質濃度を測定するための非常に重要なツールです。考慮すべき重要な要素には、正確な標準曲線の生成と正確な吸光度測定が含まれます。