ブラッドフォードたんぱく質アッセイ計算をマスターして正確なたんぱく質定量化を行う

ブラッドフォードタンパク質アッセイ計算の紹介

ブラッドフォードタンパク質アッセイは、溶液中のタンパク質濃度を決定するための迅速かつ正確な方法です。この技術は、クマシーブルー染料がタンパク質に結合することに基づいており、それによって測定可能な色の変化が生じます。色の変化の程度は、タンパク質濃度に直接比例します。

数式の理解

タンパク質濃度を計算するために使用される公式は次のとおりです:

• 吸光度分光光度計を使用して595 nmで測定された吸光度値。
• 割り込みアッセイ中に生成された標準曲線のy切片は、通常、線形回帰分析から得られます。
• 傾斜標準曲線の傾きは、線形回帰分析から得られたものでもあります。

結果、 タンパク質濃度は、マイクログラム/ミリリットル（µg/mL）で表されます。

例計算

計算が実際にどのように機能するかを見るために、例を見ていきましょう:

• 完了したブラッドフォードタンパク質アッセイからのデータが次のようにあるとします:
• 吸光度 = 0.75
• 割り込み = 0.1
• 傾斜 = 1.5

この式を使用すると、タンパク質濃度を計算できます。

これにより、

実生活の例

研究室で科学者たちがさまざまな細胞ライセート中のタンパク質量を定量化する作業を行っています。彼らはブラッドフォードタンパク質アッセイを実施し、サンプルの一つの吸光度が0.65であることを確認しました。以前の実験から、切片が0.08でスロープが1.4であることを知っています。これらの値を私たちの公式に代入すると:

これにより、

この迅速かつ正確な測定は、研究者が実験を進めるのを助け、適切なタンパク質濃度で作業していることを保証します。

一般的な問題とエラー処理

ブラッドフォードタンパク質アッセイを実施する際に発生する可能性のある一般的な問題がいくつかあります:

• 不正確な標準曲線の生成基準を正確に準備し、測定してください。
• 他の物質による干渉アッセイに干渉する可能性のある物質、例えば洗剤には注意してください。
• 測定誤差分光光度計が適切に校正され、正常に機能していることを確認してください。

よくある質問 (FAQ)

Q: 標準曲線の範囲外の吸光度値の場合はどうなりますか？

サンプルを希釈して、その吸光度が標準曲線の範囲内に収まるようにし、その後濃度を再計算してください。

Q: ブラッドフォードアッセイに異なる波長を使用できますか？

A: ブラッドフォードタンパク質アッセイは、595 nmでの吸光度を測定するために特別に設計されています。異なる波長を使用すると、不正確な結果につながる可能性があります。

Q: 標準曲線の正確性をどのように確保しますか？

A: 測定を行うたびに新鮮な標準を準備し、正確に測定してください。複数の複製を使用し、結果を平均してください。