ブラッドフォードたんぱく質アッセイ計算をマスターして正確なたんぱく質定量化を行う

Bradford タンパク質アッセイ計算の概要

Bradford タンパク質アッセイは、溶液中のタンパク質の濃度を迅速かつ正確に測定する方法です。この技術は、タンパク質にクマシーブリリアントブルー色素が結合することに基づいており、分光光度計を使用して測定できる色の変化をもたらします。色の変化の度合いは、タンパク質濃度に正比例します。

計算式の理解

タンパク質濃度の計算に使用される式は次のとおりです。

• 吸光度: 分光光度計を使用して 595 nm で測定された吸光度値。
• 切片: アッセイ中に生成された標準曲線の y 切片。通常は線形回帰分析から取得されます。
• 傾き: 標準曲線の傾き。これも線形回帰分析から取得されます。

結果の タンパク質濃度 は、1 ミリリットルあたりのマイクログラム (µg/mL) で表されます。

計算例

計算がどのように機能するかを例で確認してみましょう。実践:

• Bradford タンパク質アッセイが完了した次のデータがあるとします:
• 吸光度 = 0.75
• 切片 = 0.1
• 傾き = 1.5

この式を使用して、タンパク質濃度を計算できます:

結果は次のようになります:

実際の例

科学者がさまざまな細胞溶解物中のタンパク質の量を定量化している研究室を考えてみましょう。科学者は Bradford タンパク質アッセイを実行し、サンプルの 1 つで吸光度が 0.65 であることがわかりました。以前の実験から、切片は 0.08、傾きは 1.4 であることがわかっています。これらの値を式に代入すると、次のようになります:

結果は次のようになります:

この迅速かつ正確な測定により、研究者は実験を進め、正しいタンパク質濃度で作業していることを確認できます。

一般的な問題と処理エラー

Bradford タンパク質アッセイを実行するときに発生する可能性のある一般的な問題がいくつかあります:

• 標準曲線の生成が正しくない: 標準を正確に準備して測定していることを確認してください。
• 他の物質による干渉: 洗剤など、アッセイに干渉する可能性のある物質に注意してください。
• 測定エラー: 分光光度計が適切に校正され、機能していることを確認してください。

よくある質問 (FAQ)

Q: 吸光度値が標準曲線の範囲外の場合はどうなりますか?

A: 吸光度が標準曲線の範囲内に収まるようにサンプルを希釈し、濃度を再計算してください。

Q: Bradford アッセイに別の波長を使用できますか?

A: Bradford タンパク質アッセイは、595 nm で吸光度を測定するために特別に設計されています。別の波長を使用すると、結果が不正確になる可能性があります。

Q: 標準曲線の精度を確保するにはどうすればよいですか?

A: アッセイを実行するたびに新しい標準を準備し、正確に測定してください。複数の反復を使用して結果を平均してください。