Compreendendo a equação do ensaio de proteína de Bradford: um guia abrangente

Compreendendo-a-Equação-do-Ensaios-de-Proteína-de-Bradford

O-Ensaios-de-Proteína-de-Bradford-é-um-procedimento-analítico-espectroscópico-rápido-e-preciso-usado-para-medir-a-concentração-de-proteína-em-uma-solução.-Aqui-está-a-análise:

• Cbradford-é-a-concentração-da-proteína-(mg/mL).
• A595-é-a-leitura-de-absorbância-da-amostra-em-595-nm.
• Ablank-é-a-leitura-de-absorbância-do-branco-(sem-proteína).
• k-é-a-inclinação-derivada-da-curva-padrão-(mg/(mL-*-absorbância)).

Utilizando-Parâmetros:-Exemplos-e-Interpretações

Imagine-que-você-tem-uma-solução-de-amostra,-e-você-a-colocou-em-um-espectrofotômetro.-A-absorbância-em-595-nm-foi-registrada-em-0,5,-e-para-o-branco,-foi-0,1.-A-inclinação-da-curva-padrão-de-BSA-(k)-é-de-0,2-mg/mL-por-unidade-de-absorbância.-Inserindo-isso-na-nossa-equação,-a-concentração-de-proteína-Cbradford-seria-calculada-da-seguinte-forma:

Cbradford-=-(0,5---0,1)-/-0,2-=-2-mg/mL

Saída:

• Cbradford-=-a-concentração-da-proteína-em-mg/mL

Faixa-Linear-e-Precisão

Tenha-em-mente-que-o-Ensaios-de-Proteína-de-Bradford-possui-uma-faixa-linear-conhecida-(geralmente-entre-1-100-µg/mL-de-proteína).-Além-dessa-faixa,-a-precisão-diminui-e-os-resultados-podem-ser-inconsistentes.-Isso-significa-que-a-inclinação-k-deve-ser-determinada-com-precisão-em-um-ambiente-controlado-usando-uma-proteína-padrão,-como-a-Albumina-de-Soro-Bovino-(BSA).

Validação-de-Dados-e-Condições-Experimentais

É-essencial-ter-todos-os-valores-dentro-das-faixas-apropriadas-para-obter-resultados-precisos.-Desvios,-como-usar-um-comprimento-de-onda-diferente-de-595-nm,-podem-desviar-significativamente-os-resultados.

• Medir-A595---O-espectrofotômetro-deve-ser-zerado-antes-de-inserir-as-amostras.
• Garantir-preparo-adequado---Diluir-as-amostras-conforme-necessário-para-colocá-las-dentro-da-faixa-mensurável.

Perguntas-Frequentes-(FAQs)

• P:-O-que-pode-interferir-nas-leituras-do-Ensaios-de-Bradford?
  R:-Detergentes-e-altos-níveis-de-agentes-redutores-podem-interferir-no-ensaio.-Controles-adequados-devem-ser-incluídos-para-medições-precisas.
• P:-A-curva-padrão-pode-ser-reutilizada?
  R:-Para-maior-confiabilidade,-gere-uma-nova-curva-padrão-toda-vez-que-realizar-o-ensaio.

Resumo

A-Equação-do-Ensaios-de-Proteína-de-Bradford-é-uma-ferramenta-inestimável-na bioquímica para determinar a concentração de proteína em uma solução. Fatores críticos a considerar incluem a geração precisa da curva padrão e as medições corretas de absorbância.

Tags: Bioquímica, Proteina ensaios, Técnicas de laboratório