Освоение Bradford Protein Assay Calculation для точного количественного определения белка

Введение в расчет анализа белка Брэдфорда

Бредфордский протеиновый метод — это быстрый и точный способ определения концентрации белков в растворе. Эта техника основана на связывании красителя Кумации Бриллиантовой Сини с белками, что приводит к изменению цвета, которое можно измерить с помощью спектрофотометра. Степень изменения цвета прямо пропорциональна концентрации белка.

Понимание формулы

Формула, используемая для расчета концентрации белка, выглядит следующим образом:

• абсорбцияЗначение поглощения, измеренное на длине волны 595 нм с использованием спектрофотометра.
• перехватy-перехват от стандартной кривой, генерируемой во время анализа, обычно получаемый из линейного регрессионного анализа.
• склонНаклон стандартной кривой, также полученный в результате линейного регрессионного анализа.

Результат, концентрация белкавыражается в микрограммах на миллилитр (мкг/мл).

Пример расчета

Давайте рассмотрим пример, чтобы увидеть, как работает расчёт на практике:

• Предположим, что у нас есть следующие данные из завершенного теста на белок Брадфорда:
• абсорбция = 0.75
• перехват = 0.1
• склон = 1.5

Используя формулу, мы можем вычислить концентрацию белка:

Это приводит к:

Пример из реальной жизни

Рассмотрим исследовательскую лабораторию, в которой ученые работают над количественным определением количества белка в различных лизатах клеток. Они проводят анализ белка по методу Брэфорда и выясняют, что абсорбция для одного из их образцов составляет 0,65. Из предыдущих экспериментов они знают, что свободный член равен 0,08, а наклон равен 1,4. Подставив эти значения в нашу формулу:

Это приводит к:

Этот быстрый и точный метод измерения помогает исследователям продолжать свои эксперименты, что гарантирует, что они работают с правильными концентрациями белков.

Общие проблемы и обработка ошибок

Существует несколько распространенных проблем, которые могут возникнуть при проведении анализа белка Брэдафорда:

• Неправильная генерация стандартной кривойУбедитесь, что вы точно подготовили и измерили свои стандарты.
• Влияние других веществБудьте осторожны с веществами, которые могут вмешаться в анализ, такими как моющие средства.
• Ошибки измеренийУбедитесь, что спектрофотометр правильно откалиброван и функционирует корректно.

Часто задаваемые вопросы (FAQ)

В: Что делать, если моё значение поглощения выходит за пределы стандартной кривой?

Разбавьте свой образец так, чтобы его поглощение находилось в пределах диапазона стандартной кривой, а затем пересчитайте концентрацию.

В: Могу ли я использовать другую длину волны для анализа Бредфорда?

A: Протеиновый анализ Брэдифорда специально разработан для измерения поглощения на длине волны 595 нм. Использование другой длины волны может привести к неточным результатам.

В: Как мне обеспечить точность моей стандартной кривой?

A: Подготовьте свежие стандарты каждый раз, когда вы выполняете анализ, и измеряйте их точно. Используйте несколько репликатов и усредняйте результаты.