Освоение Bradford Protein Assay Calculation для точного количественного определения белка

Введение в расчет анализа белка по Брэдфорду

Анализ белка по Брэдфорду - это быстрый и точный метод определения концентрации белков в растворе. Этот метод основан на связывании красителя Кумасси бриллиантового синего с белками, что приводит к изменению цвета, которое можно измерить с помощью спектрофотометра. Степень изменения цвета прямо пропорциональна концентрации белка.

Понимание формулы

Формула, используемая для расчета концентрации белка, выглядит следующим образом:

• поглощение: значение поглощения, измеренное при 595 нм с помощью спектрофотометра.
• отсекаемый элемент: отсекаемый элемент по оси Y от стандартной кривой, полученной во время анализа, обычно получаемой из линейного регрессионного анализа.
• наклон: наклон стандартной кривой, также получаемый из линейного регрессионного анализа.

Результат, концентрация белка, выражается в микрограммах на миллилитр (мкг/мл).

Пример расчета

Давайте рассмотрим пример, чтобы увидеть, как работает расчет в практика:

• Предположим, у нас есть следующие данные из завершенного анализа белка Брэдфорда:
• абсорбция = 0,75
• отрезок = 0,1
• наклон = 1,5

Используя формулу, мы можем рассчитать концентрацию белка:

Это дает:

Пример из реальной жизни

Рассмотрим исследовательскую лабораторию, где ученые работают над количественным определением количества белка в различных клеточных лизатах. Они проводят анализ белка Брэдфорда и обнаруживают, что поглощение для одного из их образцов составляет 0,65. Из предыдущих экспериментов им известно, что пересечение равно 0,08, а наклон — 1,4. Подставляем эти значения в нашу формулу:

Это дает:

Это быстрое и точное измерение помогает исследователям продолжить свои эксперименты, гарантируя, что они работают с правильными концентрациями белка.

Распространенные проблемы и ошибки обработки

Существует несколько распространенных проблем, которые могут возникнуть при выполнении анализа белка по Брэдфорду:

• Неправильное построение стандартной кривой: убедитесь, что вы правильно подготовили и измерили свои стандарты.
• Вмешательство других веществ: помните о веществах, которые могут помешать анализу, таких как детергенты.
• Ошибки измерения: убедитесь, что спектрофотометр правильно откалиброван и функционирует правильно.

Часто задаваемые вопросы (FAQ)

В: Что делать, если мое значение поглощения выходит за пределы диапазона стандартной кривой?

A: Разбавьте образец так, чтобы его поглощение попадало в диапазон стандартной кривой, а затем пересчитайте концентрацию.

В: Можно ли использовать другую длину волны для анализа Брэдфорда?

A: Анализ белка Брэдфорда специально разработан для измерения поглощения при 595 нм. Использование другой длины волны может привести к неточным результатам.

В: Как обеспечить точность моей стандартной кривой?

A: Готовьте свежие стандарты каждый раз, когда вы проводите анализ, и измеряйте их точно. Используйте несколько повторов и усредняйте результаты.