Понимание уравнения метода Брэ́дфорда́ для определения концентрации белка: всеобъемлющее руководство

Понимание уравнения анализа белка по Брэдфорду

Анализ белка по Брэдфорду — это быстрая и точная спектроскопическая аналитическая процедура, используемая для измерения концентрации белка в растворе. Вот разбивка:

• Cbradford — концентрация белка (мг/мл).
• A595 — показание поглощения образца при 595 нм.
• Ablank — показание поглощения холостого раствора (без белка).
• k — наклон, полученный из стандартной кривой (мг/(мл * поглощение)).

Использование параметров: примеры и интерпретации

Представьте, что у вас есть раствор образца, и вы поместили его в спектрофотометр. Поглощение при 595 нм было зарегистрировано на уровне 0,5, а для холостого раствора оно составило 0,1. Наклон стандартной кривой BSA (k) составляет 0,2 мг/мл на единицу поглощения. Подставив это в наше уравнение, концентрация белка Cbradford будет рассчитана следующим образом:

Cbradford = (0,5 - 0,1) / 0,2 = 2 мг/мл

Выход:

• Cbradford = концентрация белка в мг/мл

Линейный диапазон и точность

Помните, что анализ Брэдфорда имеет известный линейный диапазон (обычно от 1 до 100 мкг/мл белка). За пределами этого диапазона точность снижается, и результаты могут быть непоследовательными. Это означает, что наклон k следует точно определять в контролируемой установке с использованием стандартного белка, такого как бычий сывороточный альбумин (БСА).

Проверка данных и экспериментальные условия

Для получения точных результатов важно, чтобы все значения находились в соответствующих диапазонах. Отклонения, такие как использование длины волны, отличной от 595 нм, могут значительно исказить результаты.

• Измерьте A595 - Спектрофотометр должен быть обнулен перед вставкой образцов.
• Обеспечите правильную подготовку - Разбавьте образцы по мере необходимости, чтобы поместить их в диапазон измерения.

Часто задаваемые вопросы (FAQ)

• В: Что может повлиять на показания анализа Брэдфорда?
  О: Моющие средства и высокие уровни восстановителей могут повлиять на анализ. Для точных измерений следует включить надлежащие элементы управления.
• В: Можно ли повторно использовать стандартную кривую?
  О: Для надежности создавайте новую стандартную кривую каждый раз при выполнении анализа.

Резюме

Уравнение анализа белка Брэдфорда является бесценным инструментом в биохимии для определения концентрации белка в растворе. К критическим факторам, которые следует учитывать, относятся точное создание стандартной кривой и правильные измерения поглощения.