理解Bradford蛋白质测定公式:全面指南

了解 Bradford 蛋白质测定方程式

Bradford 蛋白质测定是一种快速、准确的光谱分析程序，用于测量溶液中的蛋白质浓度。具体细节如下：

• Cbradford 是蛋白质浓度（mg/mL）。
• A595 是样品在 595 nm 处的吸光度读数。
• Ablank 是空白（无蛋白质）的吸光度读数。
• k 是从标准曲线得出的斜率（mg/(mL * 吸光度)）。

利用参数：示例和解释

假设您有一个样品溶液，并将其放在分光光度计中。595 nm 处的吸光度记录为 0.5，空白的吸光度为 0.1。BSA 标准曲线的斜率（k）为每吸光度单位 0.2 mg/mL。将其代入我们的方程式中，蛋白质浓度 Cbradford 的计算方法如下：

Cbradford = (0.5 - 0.1) / 0.2 = 2 mg/mL

输出：

• Cbradford = 蛋白质浓度（单位：mg/mL）

线性范围和准确度

请记住，Bradford 测定法具有已知的线性范围（通常在 1-100 µg/mL 蛋白质之间）。超出此范围，准确度会降低，结果可能不一致。这意味着应使用标准蛋白质（例如牛血清白蛋白 (BSA)）在受控设置中准确测定斜率 k。

数据验证和实验条件

所有值都必须在适当的范围内，才能获得准确的结果。偏差（例如使用 595 nm 以外的其他波长）可能会严重扭曲结果。

• 测量 A595 - 在插入样品之前，应将分光光度计归零。
• 确保正确准备 - 根据需要稀释样品以置于可测量范围内。

常见问题 (FAQ)

• 问：什么会干扰 Bradford 测定读数？
  答：洗涤剂和高浓度还原剂会干扰测定。应包括适当的对照以确保测量准确。
• 问：标准曲线可以重复使用吗？
  答：为了可靠性，每次进行测定时都应生成一条新的标准曲线。

摘要

Bradford 蛋白质测定方程式是生物化学中用于测定溶液中蛋白质浓度的宝贵工具。需要考虑的关键因素包括准确的标准曲线生成和正确的吸光度测量。